如何从临床标本中分离核酸?

1.临床分子生物学检验的主要对象是什么?是核酸分子生物标志物即是DNA、RNA,所以怎样从临床标本中提取核酸是整个分子检验的前提。而提取核酸的质量也将直接影响检验的科学准确性。

如何从临床标本中分离核酸?

2.地中海贫血这种病是一种遗传性疾病,要想检测待检者是否含有这种疾病的致病基因的突变,临床上是取待检者的血液标本,此外,临床上检验感染性疾病乙肝病毒DNA,同样采取的是待检者的血液标本,通过对静脉血的分子检测,我们可以明确待检者是否有HBV的感染,量是多少,可以体现HBV在体内的复制程度如何,并且是哪一种基因型HBV的感染,我们知道病毒容易发生基因的变异,不同基因型的HBV病毒学和临床特性不同,所以HBV的基因分型有很重要的临床意义,此外还可以检测HBV是否发生了耐药基因的变异,使其对抗病毒药物产生了耐药性,除了HBV还可以检测丙肝病毒HCV和艾滋病毒HIV这些RNA病毒的特异RNA片段,而用到的同样是待检者的静脉血标本。

3.让我们整体来看一下,临床分子检验的项目有哪些呢?这是比较全的关于临床中可以做的一些分子检验项目...

4.用于后续检测核酸的血液标本,必须使用正确的血液抗凝剂如乙二胺四乙酸二钠,简称...

而不能使用肝素抗凝剂,因为肝素对后续核酸检测中的一些酶有较强的抑制作用,就容易造成假阴性的结果。

5.采集分泌物标本时,现在常用到一种小工具叫棉拭子有口腔拭子、咽拭子、肛拭子。就是棉花缠绕在一根小棍一端,可以吸附脱落的细胞或者分泌物。棉拭子在感染病原体检测中,棉拭子常用于检测呼吸道、消化道处的样品采集。采样后的棉拭子置于保存液中就能用于后续核酸的提取中。

6.不仅便于肿瘤的早期诊断,还可以对患者预后作出评估,还可以用来指导肿瘤的药物靶向治疗,肿瘤标本如果是新鲜组织直接放入生理盐水中洗涤研磨,就可以用于核酸的提取,如果是石蜡切片组织,需要先进行脱蜡处理,这里要注意....从而影响后面结果的准确性。

7.尤其是在感染性疾病发生发展的进程中,病原体的数量会不断变化,低于计数的检测线就会出现假阴性的结果,所以在标本采集时要适时适量的采集标本并选择合适的分子生物学技术手段,以最大程度的保证检验结果的准确性。那针对图中所示HIV的感染你会得到什么样的具体的检验信息呢?解释该图:艾滋病毒感染多久可以检测到主要取决于检测方法,

艾滋病病毒抗体检测一般要在感染6-8周左右可以检测到;

艾滋病病毒抗原检测一般要在感染3-4周左右可以检测到;

艾滋病病毒基因检测一般要在感染10左右可以检测到;

不同的检验指标在样本采集不同时间检测出的概率不同。

8.除了采集,在标本的运送和保存环节也需要额外注意,标本采集后应尽快送至实验室进行检测,以防待检核酸分子的降解,尽可能在2-8度下低温运送。

分离纯化核酸:

1.多数情况下,我们提取的核酸分子是来源于标本中细胞的,例如血液标本中的病原体细胞,唾液标本中我们自身的口腔粘膜上皮细胞,所以核酸分离的第一步就是要裂解细胞,然后....

2.接下来分别介绍DNA、RNA的分离纯化方法,那由于不同的核酸分子的亚细胞...

3.基因组DNA包涵了生物体一套完整单倍体的所有遗传物质。

和对DNA有吸附作用的官能基团-例如硅,通过二者的可逆结合来分离纯化DNA的,而且不仅是基因组DNA,吸附柱法还可以通过其他不同的吸附载体和裂解液,来分离纯化其他的核酸,如质粒DNA...,吸附柱法相比经典的酚抽提法更快速、安全(不需要用到酚、氯仿这些有毒试剂)...

5.磁珠法是在纳米级磁珠表面装载有对DNA有吸附作用的官能基团,通过官能集团与DNA生物可逆结合....用这种方法提取DNA纯度高,更便捷大概30-40分钟就可以完成DNA的提取。所以也便于高通量、自动化操作。

6.那恰当的操作是尽量能在低温条件下操作,避免高温对核酸化学键的破坏,同时低温可以有效抑制核酸酶对核酸的降解活性。提取大分子线性核酸时需要额外注意物理机械力对核酸结构的破坏,在某些时候还是要温柔一些,不能过大力度的震荡,还要保证缓冲液的PH值,避免过酸或过碱对磷酸二酯键的破坏。

7.提取总RNA不能满足所有的通途,因为总RNA中绝大部分是rRNA,需要进一步分离纯化mRNA。

8.自动化核酸提取可有效节省人力成本,缩短工作时间,保证临床检测结果的可靠性和重复性,同时把生物安全风险和样本间的交叉污染的风险降到最低。